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辽宁35选7一等奖多少钱:分子生物學技術在動植物病原體的檢測中的應用

來源:原創論文網 添加時間:2019-05-15

辽宁35选7图表 www.bfptp.com   摘要:在分子生物學技術日新月異的今天, 其應用也愈加廣泛。本文重點對分子生物學技術在病原體檢測和動物生態學領域的應用進行了綜述, 同時闡述了常用的分子診斷技術和分子遺傳學技術。

  關鍵詞:分子診斷技術; 分子遺傳學技術; 應用;

  隨著時代的飛速發展, 分子生物學領域也突飛猛進, 許多新的研究手段和技術應運而生。這些手段和技術在生物學的各個領域都有著廣泛的應用。

動物學論文

  一 分子生物學技術在動植物病原體的檢測中的應用

  近年來, 隨著分子生物學手段和技術愈發廣泛和深入的使用, 使得疾病檢測的技術在水產養殖中的應用有了迅猛進展, 這很大程度上提高了水產養殖病害診斷水平, 使得檢測各種病原微生物更為安全、方便、快捷。分子診斷技術基于每種病原體都含有特異性的DNA或RNA序列, 通過對病原體核酸分子的鑒定來證實病原體, 該技術能有效地把病原體鑒定到亞種, 從而具體很高的應用價值。

  二 分子生物學技術在動物生態學領域里的應用

  分子生物學相關的技術和手段已在動物生態學領域廣泛應用, 且取得了很好的結果。其相關應用在主要在以下幾個領域:

  (一) 系統發生

  系統發生主要包括如下兩個方面:一是了解物種之間的種群進化關系;二是辨別滅絕的物種。如今, mt DNA已成為其主要資料來源。

  (二) 遷移和基因漂移

  遷移是指具有某一基因頻率的一部分種群, 遷移至基因頻率不同的另一種群, 雜交并定居, 從而改變了種群的基因頻率, 它是重要的種群結構的內容。而基因漂移則是由于某一種目標基因自發的進行轉移, 使附近的近緣物種受到影響從而發生基因的改變, 最終生成一種新的具有目標基因優勢特征的物種。

  (三) 交配制度

  對交配制度的研究可以衡量在自然狀態下個體的繁殖成功。主要研究手段是多基因位點指紋法、單基因位點指紋法、RFLP分析法。

  (四) 性別確定

  性別是由特定的DNA決定的, 是單基因位點上的等位差異, 這種差異包含性染色體。現如今根據人類性別決定主要取決于Y染色體上的性別決定區域, 我們就可以運用分子生物學技術 (如做探針) 來對哺乳動物進行性別的鑒定。

  三分子診斷技術

  分子診斷技術目前主要包括探針雜交、核苷酸測序、PCR (聚合酶鏈式反應) 、和限制性酶切等, 其中PCR和核酸雜交技術是病害檢測中最常用的兩個方法。

  (一) PCR檢測技術

  PCR檢測技術包括常規定性PCR檢測方法、熒光定量PCR技術和PCR-ELISA技術等;

  PCR技術又稱DNA體外擴增技術。使用PCR來進行疾病診斷具有很多傳統診斷方法所不具備的優點, 如操作更加簡單便捷, 大大縮短了診斷時間;由于PCR技術的特異性強, 這也使得診斷的正確性有了保證。

  1. 常規定性PCR檢測方法

  基于特定的情況設計引物, 然后進行PCR, 將得到的產物使用電泳來檢驗是否成功得到特定的條帶, PCR擴增產物的有或無即可顯示樣品是否被特定的病原體感染。以上即是使用常規定性PCR檢測方法進行疾病診斷的基本步驟。

  2. 熒光定量PCR技術

  熒光定量PCR技術是傳統PCR技術的突破, 與常規性的PCR技術相比, 熒光定量PCR技術又實現了一次飛躍。該技術可以對DNA或RNA樣品進行定量和定性分析, 其中定量分析又包括絕對定量分析和相對定量分析;此外熒光定量PCR技術還可以對PCR產物進行定性分析?;諫鮮黽傅? 熒光定量PCR技術在臨床患病動物的治療效果觀察及指導用藥方面具有重大意義, 該技術現已廣泛應用于臨床診斷、疾病研究及藥物研發等領域。

  3. PCR-ELISA技術

  PCR-ELISA技術是傳統PCR技術與ELISA技術 (酶聯免疫吸附) 的結合, 該技術方便快捷, 有PCR儀和酶標儀即可完成, 對儀器的要求相對較低, 在特異性和靈敏度等方面均有很大的提高, 因而在臨床具有一定的應用價值。PCR-ELISA技術主要包括三個部分:聚合酶鏈式反應 (PCR) 、產物與探針的雜交及ELISA酶標顯色, 即在PCR之后利用酶聯免疫吸附試驗的原理, 使用酶標抗體, 通過液相或雜固相雜交實現定量檢測。該技術如今已經被廣泛的應用于病原微生物的檢測中, 但由于酶聯免疫吸附技術存在的一些假陽性或污染等問題使得該技術在病原微生物診斷中的應用受到限制。

  (二) 核酸雜交檢測技術

  核酸雜交是被廣泛應用于基因診斷及遺傳學研究, 它是一項基本的分子生物學技術, 原理即核酸分子的堿基具有互補性。核酸雜交的形式有多種, 常用的是Southern雜交、Northern雜交和原位雜交等, 已標記的核酸探針可用來檢測待測核酸樣品中特定基因序列。根據探針的來源和性質不同又可分為DNA探針, RNA探針, c DNA探針, c RNA探針及寡核苷酸探針等幾類, 其中DNA探針還有單鏈和雙鏈之分?;蛺秸氡曇俏鋦荼曇欠椒ú煌煞治派湫院頭欠派湫蘊秸氡曇俏锪醬罄? 由于放射性探針標記物的靈敏度和特異性極高, 因此它是應用最多的一類核酸探針標記物, 可檢測出樣品中少于1000個分子的核酸含量。

  (三) 限制性酶消化技術

  限制性酶消化技術包括限制性片段長度多態性分析、隨機擴增多態性DNA技術、擴增性片段長度多態性技術等。

  1. 限制性片段長度多態性分析

  PCR-RFLP技術 (RFLP) 即聚合酶鏈式反應—限制性片段長度多態分析技術, 該技術是在傳統的PCR技術基礎上發展起來的。首先采用PCR擴增出包含堿基置換的一段DNA, 該段DNA經某一限制性內切酶切割成確定的片段, 再利用瓊脂糖凝膠電泳分離產物, 通過比較來確定是否變異。限制性片段長度多態性分析能很好地檢測出某段DNA在酶切后得到的產物的大小, 靈敏度很高。使用PCR-RFLP技術可以對近緣的病原體進行鑒定, 還可對于致病基因的突變進行檢測。

  2. 隨機擴增多態性DNA技術

  隨機擴增多態性DNA技術即為RAPD, 該技術采用一系列隨機的引物對所研究的基因組進行PCR擴增, 產物經過電泳檢測, 進而對DNA的多態性進行檢測。DNA具有多態性即可能是由于堿基發生突變、缺失或插入等原因。該方法建立在傳統PCR技術的基礎上, 不需要專門設計引物, 操作簡單快捷, 檢測效率高, 樣品用量少, 但采用RAPD技術分析穩定性比較差。

  3. 擴增性片段長度多態性技術

  擴增性片段長度多態性技術即AFLP技術, 該技術結合了傳統PCR技術和RFLP的特點, 從而更加高效和可靠, 此外它操作簡單快捷, 因而被廣泛應用于生物學領域。擴增AFLP技術實質就是將經過兩種或兩種以上的限制性內切酶切割所形成的片段末端與雙鏈接頭連接。

  四常用的分子遺傳學技術

  (一) DNA指紋技術

  DNA指紋技術 (DNA fingerprinting) 的基礎是小衛星DNA (minisatellite DNA) , 小衛星DNA是基因組中的高變區。Jeffreys等 (1985) 發現小衛星DNA都含有一段相同的核心序列 (雖然其重復單位的長度和序列不完全相同) , 若把核心序列串聯起來作為分子探針, 與不同個體的DNA進行分子雜交, 就會形成特有的雜交圖譜, 不同個體的雜交圖譜均有很大的不同。由于這種雜交圖譜與人的指紋一樣具有高度的特異性, 因而被稱作DNA指紋技術。

  (二) DNA—DNA雜交

  核酸雜交是分子生物學的一項基本技術, 都是基于核酸的堿基互補配對原理。核酸雜交有多種形式, 從雜交材料可分為DNA-DNA雜交、RNA-RNA雜交和DNA-RNA雜交。DNA—DNA雜交技術是最常用的的一種分子遺傳學技術, 其簡單形式之一就是將DNA點印并固定于濾膜上, 然后將探針加以標記 (采用放射性或者非放射性標記法) 。

  五展望

  現如今, 分子生物學技術在動物疫病的診斷、預防和治療技術方面扮演著至關重要的角色, 例如可以運用分子生物學技術生產相關藥物或者核酸疫苗, 對一些疾病進行快速準確地診斷, 培育轉基因動物等。相信隨著分子生物學技術的不斷深入發展, 其應用將會愈來愈廣泛。

  參考文獻
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